Plasmide CRISPR d'Activation (h) Dermatopontin: sc-402924-ACT

Le gène DPT humain code la dermatopontine, une protéine de la matrice extracellulaire (MEC) qui se lie aux collagènes et s’associe aux réseaux fibrillaires afin d’influencer l’organisation matricielle, l’adhérence cellule–matrice et les propriétés biomécaniques des tissus conjonctifs. La dermatopontine contribue au comportement des fibroblastes et au remodelage de la MEC en modulant les interactions entre fibrilles de collagène, protéoglycanes et récepteurs de surface cellulaire, soutenant des processus tels que la réparation des plaies et l’architecture stromale. Des modifications de l’expression de DPT et de la composition de la MEC sont fréquemment étudiées dans des contextes de fibrose, de stroma associé aux tumeurs, ainsi que de remodelage vasculaire ou dermique, où les changements d’organisation du collagène et d’adhérence cellulaire affectent la fonction tissulaire. En tant que régulateur associé à la matrice, DPT est également pertinent pour les études du remodelage induit par le TGF-β et, plus largement, des programmes transcriptionnels liés à la mécanotransduction.

Dermatopontin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DPT sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Dermatopontin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DPT dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DPT, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Dermatopontin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DPT natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Dermatopontin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Dermatopontin dans les cellules tumorales présentant une expression de DPT silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.