Derlin-3 Double Nickase Plasmid (h): sc-413887-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Derlin-3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Derlin-3 Double-Nickase-Plasmid (h) und Derlin-3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DERL3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Derlin-3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-413887-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Derlin-3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-413887-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DERL3 kodiert Derlin-3, eine Membrankomponente des endoplasmatischen Retikulums (ER) der ER-assoziierten Abbaumaschinerie (ERAD). Diese hilft dabei, fehlgefaltete luminale Proteine zu erkennen und sie zur zytosolischen Ubiquitinierung und zum proteasomalen Abbau aus dem ER zurück ins Zytosol zu retrotranslozieren. Durch die Unterstützung der Proteinkontrolle trägt Derlin-3 zur Aufrechterhaltung der ER-Homöostase und zur Modulation der Signalwege der „unfolded protein response“ (UPR) während proteotoxischem Stress bei. Eine veränderte DERL3-Expression oder epigenetische Regulation wurde in mehreren Krankheitskontexten beschrieben, darunter Krebs, wo Störungen der ERAD und der Anpassung an ER-Stress Programme des Zellüberlebens beeinflussen können. DERL3 ist daher ein nützliches Ziel, um zu untersuchen, wie ER-Proteostase mit der Funktion des sekretorischen Wegs, Stresssignalgebung und zellulärer Fitness zusammenwirkt.
Derlin-3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DERL3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DERL3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DERL3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DERL3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.