DEPTOR Lentiviral Activation Particles (m): sc-430194-LAC

Mouse Deptor kodiert DEPTOR (DEP-Domäne enthaltendes, mit MTOR interagierendes Protein), einen endogenen Inhibitor von mTORC1 und mTORC2, der an mTOR bindet und so die Kinaseaktivität, die Nährstoffsensorik und die Wachstumsfaktor-Signalübertragung moduliert. Durch die Feinabstimmung des mTOR-Signalweg-Outputs beeinflusst DEPTOR Proteinsynthese, Autophagie, Stoffwechsel und Programme des Zellüberlebens, mit nachgeschalteten Effekten auf die Signaldynamik von AKT und S6K. Eine veränderte DEPTOR-Expression wurde mit gestörter Proteostase und metabolischen Stressantworten in Verbindung gebracht, was sie für Studien zur zellulären Homöostase und krankheitsassoziierten Umverdrahtung von Signalwegen relevant macht.

DEPTOR Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Deptor-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

DEPTOR Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Deptor-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen DEPTOR-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Deptor-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.