Plasmide Double Nickase (h) DEPDC5: sc-402806-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) DEPDC5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DEPDC5 Double Nickase (h) et le plasmide DEPDC5 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DEPDC5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) DEPDC5 | sc-402806-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) DEPDC5 | sc-402806-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DEPDC5 (DEP domain containing 5) code un composant central du complexe GATOR1, un régulateur négatif de la signalisation mTORC1 en aval de la détection des acides aminés à la surface lysosomale. En agissant comme un facteur d’activation de la GTPase (GAP) envers les GTPases Rag, DEPDC5 contribue à freiner l’activité de mTORC1 induite par les nutriments, influençant ainsi l’autophagie, la synthèse protéique et le contrôle de la croissance cellulaire. L’altération de DEPDC5 a été associée à une dérégulation de la signalisation de la voie mTOR et à une excitabilité neuronale modifiée, avec des associations génétiques rapportées dans les épilepsies focales et les malformations corticales. Ces propriétés font de DEPDC5 une cible utile pour des études mécanistiques de la régulation de mTORC1, des interactions entre voies de signalisation métabolique et des perturbations des voies du neurodéveloppement.
DEPDC5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DEPDC5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DEPDC5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DEPDC5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DEPDC5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.