Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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DEP-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-402501-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DEP-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DEP-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und DEP-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PTPRJ abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: DEP-1: sc-376794
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DEP-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402501-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DEP-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402501-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PTPRJ kodiert die Rezeptor-Typ-Protein-Tyrosinphosphatase DEP-1 (CD148), eine transmembrane Phosphatase, die kinasegetriebene Signalübertragung ausbalanciert, indem sie Phosphotyrosinreste an mehreren Rezeptoren und nachgeschalteten Effektoren dephosphoryliert. DEP-1 moduliert Signalwege, die Zellproliferation, Adhäsion und Migration steuern, einschließlich der Signalgebung nachgeschaltet von Rezeptor-Tyrosinkinasen sowie von Integrin-assoziierten Komplexen. Durch seine Rolle bei der Aufrechterhaltung der Phosphorylierungs-Homöostase beeinflusst PTPRJ die Kontaktinhibition und zelluläre Antworten auf Wachstumsreize in epithelialen und endothelialen Kontexten. Eine Dysregulation oder veränderte Expression von PTPRJ/DEP-1 wurde mit aberranten Signalzuständen in Modellen der Krebsbiologie sowie der vaskulären bzw. inflammatorischen Forschung in Verbindung gebracht.
DEP-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PTPRJ-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PTPRJ abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PTPRJ-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PTPRJ-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.