Plásmido CRISPR de Activación (h) densin-180: sc-403589-ACT

LRRC7 codifica densin-180, una proteína de andamiaje de la densidad postsináptica enriquecida en sinapsis excitadoras, donde ayuda a organizar complejos proteicos que regulan la arquitectura de las espinas dendríticas y la señalización sináptica. Densin-180 se asocia con componentes de membrana y del citoesqueleto e integra vías de señalización vinculadas a la plasticidad sináptica, incluidas interacciones que acoplan la maquinaria asociada a receptores con quinasas aguas abajo y la remodelación de actina. Por su papel en el mantenimiento de la organización postsináptica y la conectividad neuronal, LRRC7 se estudia en el contexto de mecanismos de enfermedades del neurodesarrollo y neuropsiquiátricas en las que la estructura y la señalización sinápticas se encuentran alteradas. La modulación experimental de la expresión de LRRC7 respalda análisis mecanísticos de la maduración sináptica, la señalización dependiente de la actividad y la función de redes en modelos neuronales humanos.

densin-180 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LRRC7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

densin-180 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LRRC7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LRRC7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de densin-180. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LRRC7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de densin-180 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía densin-180 en células tumorales con expresión de LRRC7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.