DENND4A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407301

Übersicht

DENND4A kodiert ein Protein mit DENN-Domäne, das als Guanin-Nukleotid-Austauschfaktor für Rab-GTPasen fungiert und den endosomalen Transport sowie das Membranrecycling unterstützt. Durch die Regulation des Rab-abhängigen vesikulären Transports trägt DENND4A zur Sortierung von Fracht, zum Turnover von Rezeptoren und zur räumlichen Organisation von Signalkomplexen bei, die Membrandynamik mit nachgeschalteten Signalwegen koppeln. Seine Aktivität ist mit Prozessen wie Nährstoffsensorik, Zytoskelett-Remodelling und kompartimentierter Signalübertragung an Endomembranen verknüpft und ist damit relevant für Studien zu Zellwachstum und Stressanpassung. Eine Fehlregulation des Vesikeltransports und der Kontrolle von Rab-Netzwerken ist häufig mit onkogener Signalgebung, metabolischen Dysbalancen und neurobiologiebezogenen Phänotypen assoziiert, wodurch DENND4A ein nützlicher Knotenpunkt zur Aufklärung trafficking-assoziierter Krankheitsmechanismen ist.

Das DENND4A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DENND4A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DENND4A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DENND4A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DENND4A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DENND4A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DENND4A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DENND4A-Exone abzielen, die für die DENND4A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DENND4A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DENND4A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom DENND4A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DENND4A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DENND4A HDR-Plasmid (h) und DENND4A HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DENND4A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DENND4A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.