DENND4A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407301

Descripción general

DENND4A codifica una proteína que contiene un dominio DENN y actúa como factor de intercambio de nucleótidos de guanina (GEF) para las GTPasas Rab, favoreciendo el tráfico endosomal y el reciclaje de membrana. A través de la regulación del transporte vesicular dependiente de Rab, DENND4A contribuye a la clasificación de la carga, la renovación de receptores y la organización espacial de complejos de señalización que acoplan la dinámica de membrana con vías downstream. Su actividad se asocia a procesos como la detección de nutrientes, la remodelación del citoesqueleto y la señalización compartimentalizada en endomembranas, lo que la hace relevante para estudios de crecimiento celular y adaptación al estrés. La desregulación del tráfico vesicular y del control de la red de Rab se asocia con frecuencia a señalización oncogénica, desequilibrio metabólico y fenotipos relacionados con la neurobiología, lo que sitúa a DENND4A como un nodo útil para desentrañar mecanismos de enfermedad asociados al tráfico.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DENND4A (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DENND4A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DENND4A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DENND4A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DENND4A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DENND4A para la investigación de la señalización de DENND4A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DENND4A críticos para la función de DENND4A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DENND4A para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DENND4A CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido DENND4A CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DENND4A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DENND4A (h) y el plásmido HDR DENND4A (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DENND4A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DENND4A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.