Plasmide CRISPR/Cas9 KO DENND4A (h): sc-407301

Présentation

DENND4A code une protéine contenant un domaine DENN qui agit comme facteur d’échange de nucléotides guanyliques (GEF) pour les GTPases Rab, soutenant le trafic endosomal et le recyclage membranaire. En régulant le transport vésiculaire dépendant des Rab, DENND4A contribue au tri des cargos, au renouvellement des récepteurs et à l’organisation spatiale de complexes de signalisation qui couplent la dynamique membranaire aux voies en aval. Son activité est liée à des processus tels que la détection des nutriments, le remodelage du cytosquelette et la signalisation compartimentée sur les endomembranes, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la croissance cellulaire et de l’adaptation au stress. La dérégulation du trafic vésiculaire et du contrôle du réseau Rab est fréquemment associée à une signalisation oncogénique, à des déséquilibres métaboliques et à des phénotypes liés à la neurobiologie, faisant de DENND4A un nœud utile pour disséquer les mécanismes pathologiques associés au trafic intracellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DENND4A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DENND4A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DENND4A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DENND4A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DENND4A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DENND4A pour l'étude de la signalisation de DENND4A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DENND4A essentiels à la fonction de DENND4A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DENND4A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DENND4A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DENND4A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DENND4A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DENND4A plasmide HDR (h) et le DENND4A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DENND4A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DENND4A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.