Plasmide CRISPR/Cas9 KO Deltex-1 (m): sc-420429

Présentation

Dtx1 code pour Deltex-1, une ligase E3 de l’ubiquitine qui agit comme modulateur dépendant du contexte de la signalisation Notch en influençant les complexes de signalisation proximaux du récepteur ainsi que le renouvellement des composants de la voie. Grâce à une régulation dépendante de l’ubiquitine, Deltex-1 peut façonner les sorties transcriptionnelles qui affectent les décisions de destinée cellulaire, les programmes de différenciation et l’homéostasie des cellules immunitaires dans des modèles murins. L’activité de Dtx1 a été associée à des voies contrôlant la protéostasie et la transduction du signal, notamment via des interactions avec des programmes inflammatoires liés à NF-κB dans certains contextes cellulaires. Une dérégulation de la signalisation Notch/de l’ubiquitine impliquant Deltex-1 a été étudiée dans le dysfonctionnement immunitaire et des processus oncogéniques, ce qui fait de Dtx1 un nœud utile pour l’analyse mécanistique de phénotypes dépendants de ces voies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Deltex-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Dtx1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Dtx1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Dtx1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Deltex-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Dtx1 pour l'étude de la signalisation de Deltex-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Dtx1 essentiels à la fonction de Deltex-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Dtx1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Deltex-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Deltex-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Dtx1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Deltex-1 plasmide HDR (m) et le Deltex-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Dtx1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Dtx1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.