Delta CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400790

概要

DLL1はヒトのDelta-like 1（Delta）リガンドをコードしており、Notch受容体を活性化する膜結合型リガンドとして、接触依存性（ジャクスタクリン）シグナル伝達を介して細胞運命決定、組織パターニング、幹／前駆細胞の維持を制御します。DLL1–NOTCHの結合により、Notch細胞内ドメインがプロテアーゼにより切断・遊離され、RBPJ/CSLを介した転写プログラムが作動して、分化・増殖・アポトーシスに影響を及ぼします。この経路は発生プログラムや微小環境からのシグナルと交差しており、その破綻は腫瘍生物学、神経新生、免疫細胞の発生などの文脈でしばしば研究対象となります。DLL1の発現やシグナル伝達のダイナミクスは、Notchリガンド—受容体のバランスが協調して制御されることで、上皮—間葉転換（EMT）や血管新生の調節にも関与します。

Delta CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDLL1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DLL1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DLL1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Deltaタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Deltaシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DLL1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Deltaの機能に不可欠なDLL1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DLL1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Delta CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDelta CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DLL1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Delta HDRプラスミド（h）および Delta HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDLL1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDLL1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。