Plasmide CRISPR d'Activation (h) Delta-4: sc-401271-ACT

Le gène humain **DLL4** code **Delta-4**, un ligand membranaire de Notch qui assure une signalisation juxtacrine régulant la spécification artérielle, les décisions « tip–stalk » (cellules de pointe vs cellules tige) et la morphogenèse du branchement vasculaire. Les interactions **DLL4–NOTCH** coordonnent des programmes transcriptionnels qui couplent le bourgeonnement angiogénique à la quiescence endothéliale, en intégrant des signaux issus du **VEGF** et d’autres facteurs du microenvironnement. Une expression dérégulée de **DLL4** ou un déséquilibre de sa signalisation est associé à un remodelage vasculaire anormal et à des états de perfusion altérés observés dans l’angiogenèse tumorale et d’autres pathologies liées au système vasculaire. En tant que nœud de voie de signalisation, **DLL4** est fréquemment étudié pour ses effets sur la différenciation endothéliale, la communication cellule–cellule et le contrôle contextuel de la prolifération.

Delta-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DLL4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Delta-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DLL4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DLL4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Delta-4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DLL4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Delta-4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Delta-4 dans les cellules tumorales présentant une expression de DLL4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.