Particules Lentivirales d'Activation (m) Delta-3: sc-420011-LAC

Le gène murin *Dll3* code Delta-3, un ligand atypique de type Delta qui module la signalisation Notch au cours du développement embryonnaire, avec des rôles majeurs dans la somitogenèse, la neurogenèse et des programmes de différenciation dépendant d’une communication cellule–cellule précise. Contrairement aux ligands activateurs canoniques, DLL3 est souvent associé au trafic intracellulaire et à une suppression ou un réglage fin, dépendant du contexte, de la sortie de la voie Notch, influençant les réseaux transcriptionnels HES/HEY et l’engagement des lignages. Une altération de l’activité de *Dll3* perturbe la dynamique de l’horloge de segmentation et l’organisation des vertèbres, ce qui l’associe à des phénotypes squelettiques congénitaux et à une dysrégulation du développement. Ainsi, *Dll3* est fréquemment étudié pour mieux comprendre la régulation de la voie Notch, le timing du développement et les circuits transcriptionnels qui gouvernent les décisions de destinée cellulaire.

Les particules d'activation lentivirales Delta-3 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Dll3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Delta-3 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Dll3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Delta-3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Dll3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.