Delta-3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402857-ACT

ヒトDLL3はDelta-3をコードしており、Delta様リガンドの中でも非典型的な分子として、胚発生過程におけるNotchシグナル伝達を調節します。とくに体節形成（somitogenesis）や神経内分泌系譜の規定に関与します。典型的なNotchリガンドとは異なり、DLL3は主として細胞内コンパートメントに局在し、受容体—リガンドの輸送（トラフィッキング）に影響を与えることでNotch経路の出力を微調整し、細胞運命決定や分化プログラムに作用します。DLL3発現の異常は神経内分泌腫瘍の生物学的特性やNotch依存的な転写ネットワークの変化と強く関連しており、系譜可塑性を研究するうえで有用なマーカーであると同時に、機構的に重要な結節点（ノード）でもあります。DLL3によって駆動される経路の攪乱は、発生パターニングのモデルや、前駆細胞状態の転写制御のモデルにおいても重要です。

Delta-3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DLL3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Delta-3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DLL3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDLL3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Delta-3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDLL3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDelta-3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDLL3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDelta-3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。