Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
DEF6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405524
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- DEF6 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico DEF6, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: DEF6 Anticuerpo (SW-9): sc-81992
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
DEF6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-405524 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
DEF6 (homólogo de “differentially expressed in FDCP 6”) codifica un factor de intercambio de nucleótidos de guanina asociado al sistema inmunitario que coordina la señalización aguas abajo de los receptores de antígeno, integrando eventos cercanos a la membrana con la remodelación de actina y las respuestas transcripcionales. En los linfocitos, DEF6 modula las vías de pequeñas GTPasas y contribuye a la señalización dependiente de Ca²⁺, influyendo en la expresión génica impulsada por NFAT y en programas de citocinas que determinan la activación y la diferenciación. A través de estas funciones, DEF6 participa en la organización de la sinapsis inmunológica y en una regulación más amplia de la homeostasis inmunitaria adaptativa. La actividad o expresión desregulada de DEF6 se ha relacionado con una señalización inmunitaria aberrante y con una mayor susceptibilidad a patología inmunomediada, lo que lo convierte en un objetivo útil para estudios mecanísticos de la regulación inmunitaria.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO DEF6 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DEF6 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DEF6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DEF6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DEF6.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DEF6 para la investigación de la señalización de DEF6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de DEF6 críticos para la función de DEF6
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DEF6 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido DEF6 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido DEF6 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DEF6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DEF6 (h) y el plásmido HDR DEF6 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DEF6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DEF6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.