DEDD Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423450

Descripción general

Dedd codifica la proteína DEDD, una proteína de unión al ADN que contiene el dominio efector de muerte, reguladora de la apoptosis y de programas transcripcionales vinculados a la señalización por caspasas. Se ha descrito que DEDD se asocia con el nucléolo y la cromatina, conectando las vías de receptores de muerte con mecanismos ejecutores aguas abajo y con el control, asociado al ciclo celular, de la expresión génica. En modelos murinos, la alteración de Dedd puede influir en el equilibrio entre la supervivencia y la muerte celular programada, procesos centrales para la homeostasis inmunitaria y la remodelación tisular. La apoptosis desregulada y la señalización de respuesta al estrés en las que participa DEDD son relevantes en estudios de trastornos inflamatorios, neurodegeneración y biología del cáncer, donde las decisiones alteradas sobre el destino celular contribuyen a los fenotipos de enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DEDD (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Dedd en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Dedd junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Dedd tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DEDD.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Dedd para la investigación de la señalización de DEDD, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Dedd críticos para la función de DEDD
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Dedd para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DEDD CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido DEDD CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Dedd. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DEDD (m) y el plásmido HDR DEDD (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Dedd para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Dedd definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.