Plasmide Double Nickase (h) Decorin: sc-400786-NIC

DCN code la décorine, un petit protéoglycane sécrété riche en leucines qui organise l’architecture de la matrice extracellulaire en se liant aux collagènes et en modulant l’assemblage des fibrilles. La décorine régule aussi la signalisation des facteurs de croissance, notamment le TGF-β, en influençant la transcription dépendante des SMAD, l’adhésion cellulaire et les programmes migratoires qui façonnent le remodelage tissulaire. Par ces interactions extracellulaires, DCN affecte l’activation des fibroblastes, l’équilibre angiogénique et les échanges inflammatoires au sein des microenvironnements stromaux. Une expression altérée de DCN ou des modifications de la composition du protéoglycane décorine sont associées à la fibrose, à une réparation des plaies déficiente et à la dynamique tumeur–stroma, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la signalisation matricielle.

Decorin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DCN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DCN. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DCN. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DCN.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.