Plasmide CRISPR d'Activation (h) Decorin: sc-400786-ACT

DCN code la décorine, un petit protéoglycane sécrété riche en leucines (SLRP) qui se lie aux collagènes fibrillaires et régule l’assemblage de la matrice extracellulaire (MEC), la biomécanique des tissus et l’adhésion cellule–matrice. La décorine module des axes de signalisation clés, notamment TGF-β/SMAD et des voies à récepteurs tyrosine kinase telles qu’EGFR, influençant l’activation des fibroblastes, la différenciation en myofibroblastes et le remodelage inflammatoire. Par ses rôles dans la fibrillogenèse du collagène et la séquestration des facteurs de croissance, DCN est fréquemment étudié dans la fibrose, la biologie du microenvironnement tumoral, la réparation des plaies et l’homéostasie des tissus conjonctifs. Une expression dérégulée de la décorine ou une organisation altérée de la MEC a été associée à un remodelage pathologique dans de multiples systèmes d’organes, ce qui étaye son intérêt en tant que nœud de signalisation de la MEC dans la recherche en mécanobiologie.

Decorin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DCN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Decorin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DCN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DCN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Decorin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DCN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Decorin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Decorin dans les cellules tumorales présentant une expression de DCN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.