Plasmide Double Nickase (h) DEC1: sc-402058-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) DEC1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DEC1 Double Nickase (h) et le plasmide DEC1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant BHLHE40. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DEC1 Antibody (S-8): sc-101023
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) DEC1 | sc-402058-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) DEC1 | sc-402058-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BHLHE40 code le facteur de transcription à domaine hélice-boucle-hélice basique DEC1 (également connu sous les noms BHLHE40/STRA13), un régulateur de l’expression génique dépendant du contexte qui intègre les signaux liés à l’hypoxie et au rythme circadien. DEC1 participe à des programmes transcriptionnels en aval de la détection de l’oxygène et du stress cellulaire, influençant la progression du cycle cellulaire, la différenciation et l’adaptation métabolique via des interactions avec les composants centraux de l’horloge et les réseaux répondant à l’hypoxie. En modulant des cibles impliquées dans la prolifération, l’apoptose et la signalisation inflammatoire, BHLHE40 a été associé à des altérations de la biologie tumorale, de la fonction des cellules immunitaires et des réponses au stress du microenvironnement. Ces propriétés font de DEC1 un nœud pertinent pour étudier le contrôle transcriptionnel à l’interface hypoxie–rythme circadien et les voies d’adaptation au stress dans les cellules humaines.
DEC1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BHLHE40 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BHLHE40. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BHLHE40. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BHLHE40.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.