Plasmide CRISPR d'Activation (h) DEC-205: sc-417220-ACT

LY75 code pour DEC-205 (CD205), un récepteur endocytaire de type lectine C fortement exprimé par certains sous-ensembles de cellules dendritiques et par les cellules épithéliales thymiques, où il favorise une capture efficace des ligands extracellulaires et leur acheminement vers des compartiments de traitement de l’antigène. Via l’endocytose médiée par le récepteur et l’adressage vers les voies de présentation par le CMH de classe II et de présentation croisée, DEC-205 contribue à façonner l’amorçage des lymphocytes T, la tolérance périphérique et la sélection thymique. Son expression et son trafic s’articulent avec le transport vésiculaire, le traitement dépendant des lysosomes et la biologie de la synapse immunologique. Une prise en charge antigénique dysrégulée et une distribution altérée de DEC-205 ont été étudiées dans les contextes de l’inflammation, de l’auto-immunité et de la modulation immunitaire associée aux tumeurs, comme biomarqueurs de l’état des cellules présentatrices d’antigène.

DEC-205 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LY75 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DEC-205 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LY75 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LY75, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DEC-205. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LY75 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DEC-205 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DEC-205 dans les cellules tumorales présentant une expression de LY75 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.