Plasmide CRISPR d'Activation (h) DDX60: sc-408255-ACT

DDX60 (hélicase DEAD-box 60) est une hélicase d’ARN inductible par les interférons, qui participe à l’immunité innée antivirale en détectant et en remodelant l’ARN viral et en favorisant la signalisation des interférons de type I. Elle a été impliquée dans les voies des récepteurs de type RIG-I et dans l’amplification des programmes d’expression des gènes antiviraux via la modulation du métabolisme de l’ARN et des réseaux de gènes stimulés par les interférons. Grâce à son activité hélicase, DDX60 peut influencer la stabilité et la traduction de l’ARN, modelant ainsi les réponses cellulaires à l’infection et aux signaux inflammatoires. Une expression dérégulée de DDX60 et une activité anormale des voies de l’interféron ont été associées à des pathologies d’origine immunitaire et sont fréquemment étudiées dans le contexte des interactions cancer–immunité et des états inflammatoires chroniques.

DDX60 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DDX60 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DDX60 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DDX60 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DDX60, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DDX60. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DDX60 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DDX60 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DDX60 dans les cellules tumorales présentant une expression de DDX60 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.