Partículas Lentivirales de Activación (h) DDX3X: sc-401253-LAC

DDX3X codifica una helicasa de ARN tipo DEAD-box dependiente de ATP que coordina múltiples etapas del metabolismo del ARN, incluida la exportación de ARNm, el inicio de la traducción y la dinámica de los gránulos de ARN durante el estrés celular. Mediante interacciones con complejos ribonucleoproteicos e intermediarios de señalización, DDX3X vincula la regulación posranscripcional con vías que controlan la progresión del ciclo celular, la detección inmunitaria innata y las respuestas al estrés. La actividad alterada de DDX3X se ha asociado con una homeostasis del ARN perturbada y una regulación anómala de los programas de proliferación y diferenciación, lo que la hace relevante para estudios de neurodesarrollo, biología de factores del huésped en infecciones virales y remodelación del transcriptoma relacionada con el cáncer. En células humanas, DDX3X actúa como un nodo clave para dilucidar cómo la función de las helicasas de ARN moldea los resultados de expresión génica en condiciones basales y de estrés.

Las partículas de activación lentiviral DDX3X (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de DDX3X en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral DDX3X (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción DDX3X, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de DDX3X. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo DDX3X y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.