Plasmide Double Nickase (h) DDX3X: sc-401253-NIC

DDX3X code une hélicase à ARN de type DEAD-box, dépendante de l’ATP, qui coordonne plusieurs étapes du métabolisme de l’ARN, notamment l’épissage du pré‑ARNm, l’export de l’ARNm, l’initiation de la traduction et la dynamique des granules de stress. En remodelant les complexes ARN–protéines, DDX3X intègre des signaux qui influencent la progression du cycle cellulaire, la détection immunitaire innée et les réponses au stress cellulaire. La dérégulation ou les mutations de DDX3X ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et ont été observées de façon récurrente dans divers contextes cancéreux, reflétant son influence étendue sur le traitement de l’ARN et la protéostasie. Ces propriétés font de DDX3X un nœud pertinent pour étudier la fonction des hélicases à ARN, le contrôle traductionnel et les voies qui couplent la régulation de l’ARN à la prolifération et à l’adaptation au stress.

DDX3X Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DDX3X dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DDX3X. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DDX3X. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DDX3X.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.