Plasmide CRISPR/Cas9 KO DDX37 (h): sc-412866

Présentation

DHX37 code pour l’hélicase ARN humaine dépendante de l’ATP DDX37, une protéine de la famille DEAD-box impliquée dans la biogenèse des ribosomes et le métabolisme de l’ARN. DDX37 participe à des processus nucléolaires, notamment le traitement du pré-ARNr et la maturation de la petite sous-unité ribosomique, favorisant une traduction efficace et la progression du cycle cellulaire. Par ses fonctions de remodelage des complexes ribonucléoprotéiques dépendant d’une activité d’hélicase, DDX37 s’inscrit dans des voies qui coordonnent le traitement de l’ARN avec les programmes prolifératifs. La perturbation génétique ou la dérégulation de DHX37 a été associée à des phénotypes développementaux et reproductifs, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la régulation génique spécifique des tissus et des mécanismes de maladie liés à un traitement de l’ARN altéré.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DDX37 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DHX37 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DHX37, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DHX37 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DDX37.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DHX37 pour l'étude de la signalisation de DDX37, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DHX37 essentiels à la fonction de DDX37
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DHX37 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DDX37 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DDX37 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DHX37. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DDX37 plasmide HDR (h) et le DDX37 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DHX37 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DHX37 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.