Plasmide Double Nickase (m) DDX33: sc-432143-NIC

Le gène murin *Dhx33* code DDX33, une hélicase d’ARN de type DEAD-box impliquée dans le remodelage, dépendant de l’ATP, de complexes ARN–protéines qui soutiennent le métabolisme de l’ARN et la traduction. DDX33 a été associée à la biogenèse des ribosomes et à la fonction nucléolaire, en influençant la maturation de l’ARNr et la capacité de synthèse protéique lors de la croissance cellulaire et de l’adaptation au stress. Par ces activités, DDX33 s’inscrit à l’interface de voies qui contrôlent la prolifération et les sorties de signalisation de l’immunité innée, lesquelles dépendent d’un traitement régulé de l’ARN. La dérégulation des fonctions des hélicases d’ARN est largement pertinente pour les programmes oncogéniques et les phénotypes inflammatoires, ce qui fait de *Dhx33* un nœud utile pour des études mécanistiques sur le contrôle, centré sur l’ARN, de l’état cellulaire.

DDX33 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Dhx33 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Dhx33. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Dhx33. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Dhx33.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.