Plasmide CRISPR d'Activation (h) DDX17: sc-401338-ACT

DDX17 (hélicase DEAD-box 17) est une hélicase ARN humaine dépendante de l’ATP qui remodèle l’ARN et les complexes ribonucléoprotéiques afin de coordonner plusieurs étapes du métabolisme de l’ARN. Elle participe à l’épissage du pré‑ARNm, à la co‑régulation transcriptionnelle, à la biogenèse des microARN et à des processus de maturation des ARN liés aux ribosomes, reliant ainsi l’activité d’hélicase ARN à des programmes d’expression génique qui gouvernent la prolifération et la différenciation. La fonction de DDX17 s’entrecroise avec des réseaux transcriptionnels dépendants des voies de signalisation et avec des complexes régulateurs associés à la chromatine, modulant des isoformes de transcrits spécifiques au contexte ainsi que la stabilité des ARN. Une dérégulation du traitement des ARN et du contrôle transcriptionnel associés à DDX17 a été impliquée dans des voies oncogéniques et du développement, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des altérations de l’expression génique dans des modèles de maladie.

DDX17 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DDX17 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DDX17 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DDX17 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DDX17, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DDX17. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DDX17 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DDX17 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DDX17 dans les cellules tumorales présentant une expression de DDX17 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.