Each CRISPR/Cas9 Knockout (KO) Plasmid product consists of a pool of 3 plasmids designed to ensure identification and cleavage of a specific gene for maximum knockout efficiency. Each plasmid encodes a unique 20 nt sequence derived from the GeCKO (v2) library.
Each CRISPR/Cas9 Knockout (KO) Plasmid product consists of a pool of 3 plasmids designed to ensure identification and cleavage of a specific gene for maximum knockout efficiency. Each plasmid encodes a unique 20 nt sequence derived from the GeCKO (v2) library.
20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
DDI2 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico DDI2, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
O Plasmídeo HDR DDI2 (h) (sc-408297-HDR) é recomendado para co-transfecção com o Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO DDI2 (h) para permitir a seleção de células editadas com sucesso através da integração mediada por HDR de uma cassete de resistência à puromicina e do gene repórter RFP
O Plasmídeo HDR DDI2 (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um contendo um molde de reparação dirigida por homologia (HDR) correspondente aos locais-alvo do gRNA no Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO DDI2 (h)
Cada plasmídeo HDR contém dois braços de homologia de ~800 pb que flanqueiam as cassetes de resistência à puromicina e RFP, concebidos para se ligarem a sequências de ADN genómico que rodeiam o local da quebra de cadeia dupla induzida por Cas9 e facilitarem a integração precisa mediada por HDR
Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:DDI2 Anticorpo (A-3): sc-514004