Plasmide Double Nickase (h) DDB1: sc-402067-NIC

DDB1 (damage specific DNA binding protein 1) est un adaptateur central du complexe E3 ubiquitine‑ligase CRL4 (CUL4–RBX1) qui recrute divers récepteurs de substrats afin de contrôler le renouvellement des protéines dépendant de l’ubiquitine. Dans les cellules humaines, DDB1 coordonne des voies de maintien du génome, notamment la réparation par excision de nucléotides, les réponses au stress de réplication et le contrôle des points de contrôle du cycle cellulaire, en modulant la stabilité de facteurs impliqués dans la reconnaissance des dommages à l’ADN et la progression du cycle cellulaire. Par ces fonctions, DDB1 contribue à préserver l’intégrité de la chromatine et l’homéostasie transcriptionnelle en situation de stress génotoxique. La dérégulation des réseaux d’ubiquitination liés à DDB1 a été associée à une capacité de réparation de l’ADN altérée et à des phénotypes prolifératifs pertinents pour les études en biologie du cancer et en stabilité du génome.

DDB1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DDB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DDB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DDB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DDB1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.