Plasmide CRISPR/Cas9 KO DDAH I (h): sc-402719

Présentation

DDAH1 code la diméthylarginine diméthylaminohydrolase 1 (DDAH I), une enzyme cytosolique qui hydrolyse la diméthylarginine asymétrique (ADMA) et d’autres méthylarginines apparentées, modulant ainsi l’activité de la nitric oxide synthase et la biodisponibilité cellulaire du monoxyde d’azote (NO). En régulant l’axe ADMA–NO, DDAH I influence la fonction endothéliale, l’équilibre rédox, le tonus vasculaire et les voies de signalisation inflammatoires. Une expression ou une activité altérée de DDAH1 a été associée à des phénotypes cardiovasculaires et métaboliques, et est fréquemment étudiée dans des contextes de dysfonction endothéliale et de stress oxydatif. DDAH1 est également étudiée en biologie tumorale et dans le remodelage tissulaire, où la signalisation dépendante du NO influe sur l’angiogenèse et la migration cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DDAH I (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DDAH1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DDAH1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DDAH1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DDAH I.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DDAH1 pour l'étude de la signalisation de DDAH I, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DDAH1 essentiels à la fonction de DDAH I
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DDAH1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DDAH I plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DDAH I plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DDAH1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DDAH I plasmide HDR (h) et le DDAH I (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DDAH1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DDAH1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.