DCST2 Lentiviral Activation Particles (h): sc-405719-LAC

DCST2 (DC-STAMP domain containing 2) kodiert ein multipassiges Membranprotein, das an Zell-Zell-Fusions- und Membranumbauprozessen beteiligt ist. Die stärksten funktionellen Hinweise stammen aus der Reproduktionsbiologie, wo Mitglieder der DCST-Familie zur Fähigkeit der Spermien zur Verschmelzung mit der Eizelle beitragen. Als vermutlich tetraspaninähnlicher Faktor wird DCST2 im Kontext der Gameteninteraktion, des Membrantransports und der Organisation von Oberflächenrezeptoren untersucht, die fertilisationsbezogene Signal- und Fusionsereignisse koordinieren. Eine veränderte Regulation fusionsassoziierter Membranproteine kann Fertilitätsphänotypen beeinflussen und mit Signalwegen zusammenhängen, die Zelladhäsion und Membrandynamik steuern und für die Entwicklungsbiologie relevant sind.

DCST2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente DCST2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

DCST2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der DCST2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen DCST2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen DCST2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.