Plasmide Double Nickase (h) DcR2: sc-403389-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) DcR2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DcR2 Double Nickase (h) et le plasmide DcR2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TNFRSF10D. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DcR2 Antibody (B-P30): sc-65310
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) DcR2 | sc-403389-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) DcR2 | sc-403389-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TNFRSF10D code le récepteur leurre 2 (DcR2), un membre de la superfamille des récepteurs du TNF qui se lie à TRAIL (TNFSF10) mais ne possède pas de domaine de mort cytoplasmique fonctionnel, modulant ainsi la signalisation de l’apoptose extrinsèque à la surface cellulaire. En entrant en compétition avec des récepteurs de mort tels que DR4 et DR5 pour la liaison au ligand, DcR2 peut remodeler l’activation des caspases en aval, les sorties de signalisation de NF-κB et les programmes de réponse au stress qui influencent les décisions de destin cellulaire. DcR2 est également associé à des phénotypes liés à la sénescence et à des contextes de signalisation inflammatoire où l’équilibre de la voie TRAIL affecte l’homéostasie tissulaire. Une expression altérée de TNFRSF10D a été rapportée dans de multiples contextes pertinents pour des maladies, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique pour étudier la résistance à l’apoptose et les réseaux de signalisation liés à l’immunité.
DcR2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TNFRSF10D dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TNFRSF10D. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TNFRSF10D. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TNFRSF10D.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.