Plasmide CRISPR d'Activation (h) DCBLD1: sc-404343-ACT

DCBLD1 (discoidin, contenant des domaines CUB et LCCL 1) code une protéine transmembranaire à passage unique impliquée dans la communication cellule–cellule et cellule–matrice via des interactions médiées par son domaine extracellulaire. Chez l’humain, DCBLD1 a été associée à la régulation de réseaux de signalisation qui influencent l’adhérence, la motilité et des voies liées aux récepteurs tyrosine kinases, soutenant des rôles dans le remodelage du cytosquelette et des programmes transcriptionnels dépendants du contexte. Une expression altérée de DCBLD1 a été rapportée dans des jeux de données couvrant de multiples types de tumeurs et des phénotypes associés au système vasculaire, suggérant une pertinence pour des processus tels que l’invasion, la migration liée aux métastases et le remodelage tissulaire. Ces caractéristiques font de DCBLD1 une cible utile pour des études mécanistiques reliant la signalisation des récepteurs de surface à l’activation de voies en aval et aux transitions d’état cellulaire.

DCBLD1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DCBLD1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DCBLD1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DCBLD1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DCBLD1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DCBLD1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DCBLD1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DCBLD1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DCBLD1 dans les cellules tumorales présentant une expression de DCBLD1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.