Plasmide Double Nickase (h) DCAMKL1: sc-402160-NIC

DCLK1 (DCAMKL1) code une kinase sérine/thréonine associée aux microtubules, qui intègre une liaison aux microtubules de type doublecortine à une signalisation kinase afin de réguler la dynamique du cytosquelette, la migration neuronale et la croissance des neurites. Dans des contextes épithéliaux, DCLK1 a été utilisé comme marqueur des cellules tuft et est associé à des programmes régissant le destin cellulaire, la motilité et des voies de signalisation adaptatives au stress. Parmi les associations rapportées figurent le remodelage des microtubules, des voies de signalisation liées aux MAPK et la régulation d’états transcriptionnels couplés à la différenciation. Une expression dérégulée de DCLK1 a été décrite dans plusieurs types de tumeurs et dans des contextes inflammatoires, ce qui soutient des recherches sur les mécanismes de phénotypes de type « stem », l’invasion et les interactions avec le microenvironnement, sans préjuger de résultats cliniques.

DCAMKL1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DCLK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DCLK1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DCLK1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DCLK1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.