Plasmide CRISPR d'Activation (h) DC-SIGNR: sc-404217-ACT

Le gène humain **CLEC4M** code **DC-SIGNR**, un récepteur lectine de type C enrichi dans les cellules endothéliales, qui reconnaît des glycannes à haute teneur en mannose et des glycannes fucosylés afin de médiatiser une liaison aux glucides dépendante du Ca2+. Par ses fonctions de capture de ligands et d’adhésion, DC-SIGNR influence les interactions cellule–cellule et l’engagement des agents pathogènes aux interfaces muqueuses et vasculaires, avec des effets en aval sur le trafic endocytique et la signalisation de l’immunité innée. L’activité de CLEC4M s’inscrit dans des processus de reconnaissance dépendants des glycannes qui façonnent la prise en charge des antigènes, les réponses inflammatoires et l’accrochage des leucocytes. La variabilité génétique et d’expression de **CLEC4M** a été étudiée dans des contextes liés à la susceptibilité aux maladies infectieuses et à des phénotypes immunitaires, ce qui étaye sa pertinence en tant que modulateur des interactions hôte–pathogène et hôte–microbiote.

DC-SIGNR Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CLEC4M sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DC-SIGNR Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CLEC4M dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CLEC4M, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DC-SIGNR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CLEC4M natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DC-SIGNR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DC-SIGNR dans les cellules tumorales présentant une expression de CLEC4M silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.