Plasmide CRISPR d'Activation (h) DC-SIGN: sc-401368-ACT

CD209 code pour DC-SIGN (CD209), un récepteur lectine de type C principalement exprimé à la surface des cellules dendritiques et de certains sous-types de macrophages, où il assure une reconnaissance dépendante du calcium des glycannes riches en mannose et des glycannes fucosylés. Par la liaison à ses ligands et leur internalisation, DC-SIGN module la capture des antigènes, leur adressage endosomal et leur présentation, tout en coordonnant le dialogue entre l’immunité innée et l’immunité adaptative. Les voies de signalisation et de trafic intracellulaire en aval de DC-SIGN recoupent celles qui contrôlent la maturation des cellules dendritiques, la production de cytokines et la détection des agents pathogènes, influençant ainsi la qualité de l’amorçage des lymphocytes T. Des altérations de l’activité et de l’expression de DC-SIGN ont été impliquées dans l’échappement immunitaire de microbes glycosylés ainsi que dans des contextes inflammatoires où les états d’activation des cellules dendritiques contribuent à une dérégulation immunitaire associée aux maladies.

DC-SIGN Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD209 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DC-SIGN Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD209 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD209, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DC-SIGN. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD209 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DC-SIGN au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DC-SIGN dans les cellules tumorales présentant une expression de CD209 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.