Plasmide CRISPR/Cas9 KO DBR1 (h): sc-407375
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- DBR1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique DBR1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DBR1 Antibody (3A7): sc-517060
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO DBR1 (h) | sc-407375 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
DBR1 code l’enzyme 1 de débranchage des lariats d’ARN, une phosphodiestérase conservée qui hydrolyse la liaison phosphodiester 2′–5′ au niveau des points de branchement des lariats d’intron afin de linéariser les introns excisés pour leur dégradation. Cette activité relie DBR1 au traitement de l’ARN dépendant du spliceosome, aux voies de dégradation des introns et au maintien de l’homéostasie de l’ARN, susceptibles d’influencer les programmes d’expression génique. Une perturbation du débranchage des lariats peut modifier l’équilibre entre espèces d’ARN circulaires et linéaires et remodeler la régulation post‑transcriptionnelle dans des contextes de stress et de différenciation. En conséquence, des dysfonctionnements de DBR1 ont été associés dans la littérature à des phénotypes neurologiques et à une susceptibilité accrue aux infections virales, ce qui souligne son intérêt pour des études mécanistiques du métabolisme de l’ARN dans des types cellulaires pertinents pour les maladies.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DBR1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DBR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DBR1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DBR1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DBR1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DBR1 pour l'étude de la signalisation de DBR1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de DBR1 essentiels à la fonction de DBR1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DBR1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le DBR1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DBR1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DBR1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le DBR1 plasmide HDR (h) et le DBR1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DBR1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DBR1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.