Plásmido CRISPR de Activación (h) DBC-1: sc-403056-ACT

CCAR2 codifica Deleted in Breast Cancer 1 (DBC-1), una proteína reguladora nuclear que modula programas transcripcionales al interactuar con factores asociados a la cromatina y sensores metabólicos. DBC-1 influye en la señalización dependiente de la acetilación mediante la regulación de la actividad de las sirtuinas y coopera con receptores nucleares y corre­guladores transcripcionales para modelar el control del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y la expresión génica relacionada con la apoptosis. A través de estas funciones, CCAR2/DBC-1 se vincula con vías que gobiernan la estabilidad del genoma y la adaptación al estrés, lo que lo hace relevante para estudios de reprogramación transcripcional asociada a tumores y de senescencia celular. Se han descrito alteraciones en la expresión de CCAR2 o en las redes de interacción de DBC-1 en múltiples contextos de cáncer, y también resulta de interés para investigar el crosstalk metabólico-epigenético en células humanas.

DBC-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CCAR2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DBC-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CCAR2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CCAR2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DBC-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CCAR2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DBC-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DBC-1 en células tumorales con expresión de CCAR2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.