Plasmide CRISPR/Cas9 KO DAZAP2 (h): sc-407056

Présentation

DAZAP2 (DAZ-associated protein 2) est une protéine cytoplasmique de type adaptateur, impliquée dans l’intégration des signaux proximaux des récepteurs avec des réponses transcriptionnelles et cytosquelettiques en aval. Elle a été associée à la modulation de grandes cascades de signalisation, notamment Wnt/β-caténine et MAPK/ERK, influençant la prolifération et la différenciation cellulaires ainsi que des programmes transcriptionnels dépendants du contexte. DAZAP2 s’associe également à des composants impliqués dans les réseaux de régulation de l’ARN et des protéines, ce qui étaye des rôles dans le contrôle post-transcriptionnel et dans des interactions protéiques dépendantes des signaux. Des altérations de l’expression de DAZAP2 ou de son engagement dans certaines voies ont été rapportées dans de multiples jeux de données liés au cancer, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier le remodelage de la signalisation oncogénique et les transitions d’état cellulaire dans des systèmes modèles humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DAZAP2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DAZAP2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DAZAP2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DAZAP2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DAZAP2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DAZAP2 pour l'étude de la signalisation de DAZAP2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DAZAP2 essentiels à la fonction de DAZAP2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DAZAP2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DAZAP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DAZAP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DAZAP2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DAZAP2 plasmide HDR (h) et le DAZAP2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DAZAP2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DAZAP2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.