Plásmido CRISPR de Activación (h) DAT/Dopamine Transporter/SLC6A3: sc-400391-ACT

SLC6A3 codifica el transportador de dopamina (DAT), un simportador presináptico de la membrana plasmática que elimina la dopamina de la hendidura sináptica mediante recaptación dependiente de Na⁺/Cl⁻, moldeando así el tono dopaminérgico y la duración de la señal. DAT regula el reciclaje vesicular y la homeostasis de la dopamina en los circuitos nigroestriatales y mesocorticolímbicos, influyendo en el procesamiento de la recompensa, la locomoción y la función ejecutiva. La alteración de la expresión de SLC6A3 o de la actividad del transportador se ha asociado con una neurotransmisión dopaminérgica desregulada, implicada en contextos de investigación neuropsiquiátrica y neurodegenerativa, incluidos fenotipos relacionados con la atención, la biología del consumo de sustancias y la vulnerabilidad de las vías parkinsonianas. DAT también interactúa con programas de tráfico y fosforilación dependientes de quinasas que controlan su localización en membrana y su capacidad de recaptación.

DAT/Dopamine Transporter/SLC6A3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC6A3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DAT/Dopamine Transporter/SLC6A3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC6A3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC6A3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DAT/Dopamine Transporter/SLC6A3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC6A3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DAT/Dopamine Transporter/SLC6A3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DAT/Dopamine Transporter/SLC6A3 en células tumorales con expresión de SLC6A3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.