Plásmido Doble Nickase (h) DAPK: sc-402702-NIC

La quinasa 1 asociada a la muerte (DAPK1) codifica DAPK, una quinasa de serina/treonina regulada por Ca2+/calmodulina que integra la señalización apoptótica y autofágica con la dinámica del citoesqueleto. DAPK modula las vías de muerte celular mediante la fosforilación de múltiples sustratos, influyendo en las respuestas al estrés, la anoikis y la apoptosis dependiente de mitocondrias, y se relaciona con redes de señalización MAPK e inflamatorias. La actividad o expresión alteradas de DAPK1 se han asociado con programas desregulados de supervivencia y migración celular, lo que la vincula a procesos relevantes para la enfermedad como la supresión tumoral, la señalización de estrés relacionada con la neurodegeneración y el daño tisular mediado por el sistema inmunitario. Como regulador nodal de la muerte celular programada, DAPK1 se estudia con frecuencia para desentrañar la comunicación cruzada entre vías que determina decisiones del destino celular bajo estrés genotóxico, oxidativo o por citocinas.

DAPK El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DAPK1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DAPK1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DAPK1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DAPK1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.