Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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DAP-5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420151
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- DAP-5 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico DAP-5, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: DAP-5 Anticuerpo (F-2): sc-137011
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
DAP-5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-420151 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen murino **Eif4g2** codifica **DAP-5** (también conocida como **eIF4G2**), un andamiaje no canónico de iniciación de la traducción que favorece la traducción de ARNm independiente de caperuza, especialmente en condiciones de estrés cuando la traducción dependiente de caperuza se atenúa. DAP-5 interactúa con componentes de la maquinaria de iniciación y contribuye a la traducción mediada por IRES de transcritos seleccionados, modulando la salida del proteoma durante la apoptosis, el estrés del retículo endoplásmico y la privación de nutrientes. A través de su papel en el control translacional, DAP-5 influye en decisiones de supervivencia celular, la progresión del ciclo celular y programas de diferenciación. La desregulación de redes translacionales vinculadas a EIF4G2/DAP-5 se ha asociado con contextos relevantes para la transformación oncogénica, la neurobiología y fenotipos de adaptación al estrés, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO DAP-5 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Eif4g2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Eif4g2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Eif4g2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DAP-5.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Eif4g2 para la investigación de la señalización de DAP-5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Eif4g2 críticos para la función de DAP-5
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Eif4g2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido DAP-5 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido DAP-5 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Eif4g2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DAP-5 (m) y el plásmido HDR DAP-5 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Eif4g2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Eif4g2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.