DAGLα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402826

Übersicht

DAGLA kodiert die Diacylglycerol-Lipase alpha (DAGLα), eine membranassoziierte Serin-Hydrolase, die die Hydrolyse von Diacylglycerol katalysiert und dabei 2‑Arachidonoylglycerol (2‑AG) erzeugt – einen zentralen endocannabinoiden Lipidmediator. Durch die Kontrolle der 2‑AG‑Produktion beeinflusst DAGLα retrograde synaptische Signalübertragung, die Aktivierung des CB1‑Rezeptors und die aktivitätsabhängige Modulation der Neurotransmitterfreisetzung und verknüpft so den Lipidstoffwechsel mit neuronaler Erregbarkeit und Plastizität. Die DAGLα‑Aktivität steht in Wechselwirkung mit der Phospholipase‑C–Diacylglycerol‑Signalgebung sowie mit breiteren, Arachidonsäure‑bezogenen Lipidnetzwerken, die Entzündungsprozesse und zelluläre Stressantworten prägen. Ein veränderter, DAGLA‑abhängiger Endocannabinoid‑Tonus wurde mit neuroentwicklungsbedingten und neuropsychiatrischen Phänotypen in Verbindung gebracht und wird u. a. im Kontext von Epilepsie, Schmerzverarbeitung und metabolischer Dysregulation untersucht.

Das DAGLα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DAGLA-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DAGLA-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DAGLA nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DAGLα-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DAGLA-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DAGLα-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DAGLA-Exone abzielen, die für die DAGLα-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DAGLA-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DAGLα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom DAGLα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DAGLA-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DAGLα HDR-Plasmid (h) und DAGLα HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DAGLA-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DAGLA-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.