Plasmide Double Nickase (h) DAD1: sc-404172-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) DAD1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DAD1 Double Nickase (h) et le plasmide DAD1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DAD1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) DAD1 | sc-404172-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) DAD1 | sc-404172-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DAD1 (defender against apoptotic death 1) code une sous-unité conservée du complexe oligosaccharyltransférase (OST) dans le réticulum endoplasmique, assurant la glycosylation N-liée lors du traitement co-traductionnel des protéines. En couplant le transfert de glycannes aux polypeptides naissants, DAD1 influence le contrôle qualité du repliement des protéines, l’homéostasie du RE et les voies de signalisation dépendantes de la protéostase. Une altération de la fonction de DAD1 peut sensibiliser les cellules à l’apoptose associée au stress du RE et modifier la maturation ainsi que le trafic des protéines sécrétées et membranaires. Ces propriétés font de DAD1 un nœud utile pour étudier la biogenèse des glycoprotéines, les voies de la réponse aux protéines mal repliées (UPR) et des mécanismes de protéostase pertinents pour les maladies.
DAD1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DAD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DAD1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DAD1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DAD1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.