Plasmide Double Nickase (h) DACH1: sc-404712-NIC

DACH1 (facteur de transcription 1 de la famille dachshund) est un régulateur transcriptionnel nucléaire se liant à l’ADN, qui module les décisions de destinée cellulaire au cours du développement et maintient, dans les cellules adultes, des programmes de différenciation spécifiques des tissus. Il influence des réseaux d’expression génique liés au contrôle du cycle cellulaire, à l’équilibre épithélio-mésenchymateux et à la spécification des lignages, via des interactions avec des cofacteurs et des complexes de régulation de la chromatine. L’activité de DACH1 a été associée à des voies contrôlant la prolifération et la migration, notamment par des interactions fonctionnelles avec la signalisation des récepteurs hormonaux et des programmes transcriptionnels sensibles aux facteurs de croissance. Des altérations de l’expression de DACH1 ou de son contexte régulateur ont été rapportées dans de nombreux types de tumeurs, et DACH1 est également pertinent pour les études d’organogenèse et des phénotypes de patterning congénitaux.

DACH1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DACH1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DACH1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DACH1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DACH1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.