DACH1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404712

Panoramica

DACH1 (dachshund family transcription factor 1) è un regolatore nucleare che si lega al DNA ed è implicato nelle decisioni sul destino cellulare e nei programmi di differenziamento tissutale, con ruoli di primo piano nella segnalazione durante lo sviluppo. Nelle cellule umane, DACH1 modula reti trascrizionali legate al controllo della proliferazione, al mantenimento della linea epiteliale e alla migrazione cellulare, includendo anche interazioni con la segnalazione dei recettori ormonali e con altri circuiti di fattori di trascrizione. Un’espressione o un’attività regolatoria alterata di DACH1 è stata associata a cambiamenti nei fenotipi oncosoppressivi, influenzando processi quali la progressione del ciclo cellulare, l’invasività e l’espressione di geni correlati alla metastasi. La sua funzione dipendente dal contesto rende DACH1 un nodo utile per studiare l’equilibrio tra repressione/attivazione trascrizionale e il rimodellamento delle vie di segnalazione in modelli rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DACH1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DACH1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DACH1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DACH1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DACH1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DACH1 per lo studio della segnalazione di DACH1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DACH1 critici per la funzione di DACH1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DACH1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DACH1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal DACH1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DACH1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DACH1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR DACH1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DACH1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DACH1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.