Plasmide Double Nickase (h) D5DR: sc-404047-NIC

DRD5 code le récepteur dopaminergique D5 (D5DR), un récepteur couplé aux protéines G qui s’associe principalement à Gs/olf pour stimuler l’adénylate cyclase, augmenter l’AMPc et activer une signalisation dépendante de la PKA. La signalisation de D5DR s’articule avec la transmission synaptique régulée par la dopamine, l’excitabilité neuronale et la modulation de voies en aval, notamment des programmes transcriptionnels médiés par CREB. Dans le cerveau comme dans les tissus périphériques, DRD5 contribue à la régulation du fonctionnement des circuits neuronaux et à l’homéostasie vasculaire/rénale via la signalisation par l’AMPc et le dialogue du récepteur avec d’autres voies de GPCR et de canaux ioniques. Une signalisation dopaminergique dérégulée impliquant DRD5 a été étudiée dans le contexte de phénotypes neuropsychiatriques et de la régulation de la pression artérielle, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la biologie des voies dopaminergiques.

D5DR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DRD5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DRD5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DRD5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DRD5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.