D53 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423478

Übersicht

Tpd52l1 kodiert D53, ein zytosolisches Protein aus der tumor protein D52‑like-Familie, das mit der Regulation von Membrantransport, Vesikeldynamik und Zytoskelettorganisation in Verbindung gebracht wurde. In Mauszellen ist D53 mit Prozessen assoziiert, die Sekretion, Zellpolarität und Proliferation koordinieren, und es wurde berichtet, dass es mit Signalprogrammen interagiert, die das Verhalten epithelialer und stromaler Zellen prägen. Eine veränderte Expression von D52-Familienmitgliedern wurde in Zusammenhängen oncogener Transformation und gestörter Wachstumskontrolle beobachtet, wodurch Tpd52l1 ein nützliches Ziel zur Aufklärung von Mechanismen der Zellzyklusprogression, Migration und stressadaptiven Umgestaltung darstellt. Die genetische Perturbation von Tpd52l1 unterstützt Untersuchungen zur Vernetzung von Signalwegen zwischen Transportmaschinerie, mitogener Signalübertragung und Phänotypen, die für Tumorbiologie und Gewebehomöostase relevant sind.

Das D53 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tpd52l1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tpd52l1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tpd52l1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die D53-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tpd52l1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der D53-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tpd52l1-Exone abzielen, die für die D53-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tpd52l1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom D53 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom D53 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tpd52l1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das D53 HDR-Plasmid (m) und D53 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tpd52l1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tpd52l1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.