Plasmide Double Nickase (h) D2DR/Dopamine D2 Receptor: sc-400235-NIC

DRD2 code le récepteur dopaminergique D2 (D2DR), un RCPG couplé à Gi/o qui module la neurotransmission en inhibant l’adénylate cyclase, en diminuant l’AMPc intracellulaire et en régulant l’activité des canaux ioniques. La signalisation de D2DR s’articule avec les voies canoniques des RCPG, notamment PKA/CREB et MAPK/ERK, influençant la plasticité synaptique, l’excitabilité neuronale et la dynamique des circuits impliqués dans la récompense. Dans le système nerveux central, D2DR participe au contrôle présynaptique de la libération de dopamine via des autorécepteurs et à la régulation postsynaptique de la sortie striatale. Une expression ou une signalisation de DRD2 dérégulée a été associée à des phénotypes neuropsychiatriques et à des comportements dépendants de la dopamine, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la signalisation des récepteurs et du fonctionnement des circuits neuronaux.

D2DR/Dopamine D2 Receptor Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DRD2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DRD2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DRD2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DRD2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.