Plasmide CRISPR d'Activation (h) D2DR/Dopamine D2 Receptor: sc-400235-ACT

DRD2 code le récepteur dopaminergique D2 (D2DR), un RCPG couplé à Gi/o qui régule la neurotransmission en inhibant l’adénylyl cyclase, en réduisant la signalisation cAMP/PKA et en modulant l’activité des canaux ioniques. La signalisation via D2DR influence la plasticité synaptique et l’excitabilité neuronale, et interagit avec les voies MAPK/ERK ainsi qu’avec des voies médiées par la β-arrestine, qui façonnent la désensibilisation et le trafic du récepteur. Dans le système nerveux central, DRD2 constitue un nœud clé des circuits dopaminergiques contrôlant la motivation, le traitement de la récompense et la fonction motrice. Des altérations de l’expression ou de la signalisation de DRD2 ont été impliquées dans la biologie des troubles neuropsychiatriques et des troubles du mouvement, ce qui étaye son utilisation comme cible mécanistique dans les études de cartographie des voies et de génomique fonctionnelle.

D2DR/Dopamine D2 Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DRD2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

D2DR/Dopamine D2 Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DRD2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DRD2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de D2DR/Dopamine D2 Receptor. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DRD2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de D2DR/Dopamine D2 Receptor au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie D2DR/Dopamine D2 Receptor dans les cellules tumorales présentant une expression de DRD2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.