Plasmide CRISPR/Cas9 KO Cytoplasmic CysRS (h): sc-406444

Présentation

CARS code la cystéinyl‑ARNt synthétase cytoplasmique (CysRS), une aminoacyl‑ARNt synthétase de classe I qui conjugue la cystéine à son ARNt cognat afin d’assurer la fidélité de la traduction dans le cytosol. En contrôlant l’approvisionnement en ARNt\(^\text{Cys}\) chargé, la CysRS cytoplasmique soutient la synthèse protéique globale et couple la disponibilité en acides aminés aux voies de protéostasie, y compris les réponses au stress qui modulent la traduction. Une perturbation de l’activité des aminoacyl‑ARNt synthétases peut modifier la dynamique des ribosomes et déclencher une signalisation intégrée du stress, avec des effets en aval sur la croissance cellulaire, le métabolisme et des processus sensibles à l’état rédox qui dépendent de l’utilisation de la cystéine. La dérégulation du chargement des ARNt et du contrôle qualité de la traduction est pertinente pour la recherche sur des phénotypes neurodéveloppementaux et neuromusculaires, les troubles prolifératifs et l’adaptation cellulaire au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Cytoplasmic CysRS (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CARS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CARS, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CARS à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Cytoplasmic CysRS.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CARS pour l'étude de la signalisation de Cytoplasmic CysRS, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CARS essentiels à la fonction de Cytoplasmic CysRS
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CARS pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Cytoplasmic CysRS plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Cytoplasmic CysRS plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CARS. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Cytoplasmic CysRS plasmide HDR (h) et le Cytoplasmic CysRS (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CARS pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CARS définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.