Plasmide Double Nickase (m) Cytokeratin 4: sc-421353-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Cytokeratin 4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Cytokeratin 4 Double Nickase (m) et le plasmide Cytokeratin 4 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Krt4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Cytokeratin 4 Antibody (6B10): sc-52321
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Cytokeratin 4 | sc-421353-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) Cytokeratin 4 | sc-421353-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Krt4** code la cytokératine 4, une protéine de filament intermédiaire de type II qui forme des hétérodimères avec des kératines de type I afin de construire le réseau cytosquelettique des épithéliums stratifiés différenciés. La cytokératine 4 contribue à la résistance mécanique, à la cohésion intercellulaire et à la fonction de barrière épithéliale via l’assemblage et le remodelage des filaments intermédiaires au cours de la maturation des kératinocytes. Des profils d’expression des kératines altérés, notamment des perturbations de l’appariement KRT4/KRT13, sont associés aux réponses au stress épithélial et à des programmes de différenciation anormaux pertinents pour la pathologie des tissus muqueux. En tant que marqueur structurel d’états épithéliaux spécifiques, la cytokératine 4 est couramment utilisée pour étudier la différenciation, l’intégrité tissulaire et les modifications de la signalisation liée au cytosquelette en contexte de lésion ou d’inflammation.
Cytokeratin 4 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Krt4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Krt4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Krt4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Krt4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.