Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Cytokeratin 19 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400281
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Cytokeratin 19 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Cytokeratin 19, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Cytokeratin 19 Anticuerpo (A-3): sc-376126
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Cytokeratin 19 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400281 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
KRT19 codifica la citoqueratina 19 (CK19), una proteína de filamento intermedio de tipo I que se asocia con queratinas de tipo II para formar el citoesqueleto de queratinas en células epiteliales. CK19 contribuye al mantenimiento de la integridad estructural y a la mecanotransducción, participando en la polaridad celular, la dinámica de adhesión y las respuestas al estrés mediante interacciones con complejos desmosomales y hemidesmosomales. La expresión alterada de KRT19 se asocia con estados de diferenciación epitelial y con programas de remodelación como la reparación de heridas y la transición epitelio-mesénquima, lo que la vincula a cambios en la proliferación, la migración y la plasticidad celular. En biología del cáncer, CK19 se utiliza ampliamente como marcador de linaje epitelial y se estudia con frecuencia en la progresión tumoral y en fenotipos relacionados con la metástasis.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Cytokeratin 19 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen KRT19 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del KRT19 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de KRT19 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Cytokeratin 19.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en KRT19 para la investigación de la señalización de Cytokeratin 19, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de KRT19 críticos para la función de Cytokeratin 19
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de KRT19 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Cytokeratin 19 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Cytokeratin 19 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus KRT19. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Cytokeratin 19 (h) y el plásmido HDR Cytokeratin 19 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología KRT19 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana KRT19 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.